عنوان:
شناخت مفهوم رنگ آمیزی زیستی(staining vital )و غیر زیستی (Non vital staining)
اهداف آزمایش:
• پرورش پارامسی (paramaecium)
• مشاهده و بررسی واکوئل غذایی(vacuole Food)
• ✓ مشاهده و بررسی میتوکندری(mitochondria)
• ✓ مشاهده و بررسی اندامک ها ی حرکتی مژه (cillia)و تاژه(flagella)
• ✓ مشاهده و بررسی هسته(nucleus)
• ✓ بررسی توانایی زیستی غشاء پلا سمایی سلول زنده(viability)
• ✓ مشاهده سیکلوسیس (cyclosis)یا جریان سیتوپالسمی
در این آزمایش در زمان شناسایی و رنگ آمیزی اندامک
های درون سلولی با مشاهده دقیق این اندامک به مدت چند
ثانیه می توان جابجایی آن ها را در سیتوپالسم مشاهده و
دنبال کرد که در نتیجه جریان سیتوپالسمی در سلول می‌شود.
.
وسایل و مواد مورد نیاز:
1.محیط‌کشت‌هی HEY
٢.قرمز‌خنثی
٣.سبز‌ژانوس
4.لوگل(ید‌یدوره)
٥.آبی‌متیل‌یا‌سبز‌متیل
6.لام‌ولامل
7.پاستورپیپت
8.میکروسکوپ
.
روش كار
در این آزمایش از محیط کشت هی که حاوی تک یاخته‌های
مختلف می‌باشد، جهت انجام رنگ‌آمیزی حیاتی و غیر حیاتی
و مشاهده اندامک‌های درون‌سلولی استفاده می‌شود. این
محیط را با افزودن چند دانه گندم و برگ‌های پوسیده زیر
درختان به آب برکه، حداقل چند روز قبل از آزمایش فراهم
کنید. ضمن انجام ازمایش و درک مفهوم رنگ‌آمیزی زیستی و
غیر زیستی برخی از اندامک‌های درون سلولی که در
میکروسکوپ نوری قابل رؤیتند، رنگ‌آمیزی و مشاهده
می‌شوند.
ابتدا جهت مشاهده واکوئل‌های غذایی یک قطره از محیط هی را توسط پاستورپیپت روی الم قرار داده و یک قطره رنگ قرمز خنثی بر روی آنریخته، پس از المل گذاری در بزرگنمایی 40x بعد از چند دقیقه مشاهده کنید.
به حالت زنده و متحرک تک‌یاخته‌ها دقت شود. همچنین دقت شود که واکوئل‌های غذایی به تدریج ذرات کلوییدی رنگ را بدرون خود جذب کرده و پر رنگ‌تر می‌شوند. به واکوئل‌های انقباضی نیز دقت شود که در دو قطب پیکر پارامسی قرار دارند و کروی و بی‌رنگ هستند.
قطره دیگری از محیط هی را روی الم گذاشته و جهت مشاهده
میتوکندری از سبز ژانوس استفاده کرده، المل گذاری کنید و
ابتدا در بزرگنمایی 40x و پس از ثابت شدن تک‌یاخته در بزرگنمایی 100x این اندامک‌ها را مشاهده کنید. به فرم عمومی آن‌ها توجه کنید که شبیه باکتریها هستند. بدیهی است که به دلیل کوچکی و شفافیت آن‌ها بایستی کلیه امکانات تنظیم نور و کنتراست در میکروسکوپ به کارگرفته شود و با تنظیم پیچ میکروفوکوس این اندامک دقیقاً بررسی شود. به زنده بودن تک‌یاخته‌ها توجه کنید.
هم‌چنین‌در‌تک‌یاخته‌های‌زنده‌حرکت‌میتوکندری‌در‌داخل سیتوپلاسم که‌بیانگر‌برقراری‌جریان‌سیتوپالسمی می‌باشد.
مشاهدات:
هم‌چنین‌در‌تک‌یاخته‌های‌زنده‌حرکت‌میتوکندری‌در‌داخل سیتوپالسم‌که‌بیانگر‌برقراری‌جریان‌سیتوپالسمی می‌باشد،قابل‌توجه می‌باشد.
جهت‌مشاهده‌ساختار‌حرکتی،مجدداً‌یک‌قطره‌از‌محیط‌هی‌را‌روی الم‌قرار‌داده‌و‌پس‌از‌افزودن‌لوگل‌المل‌گذاری‌کنید‌و‌نمونه‌را‌در بزرگنمایی40 مشاهده‌کنید.دقت‌شود‌که‌با‌افزودن‌رنگ،نمونه ثابت
شده‌و‌تحرک‌و‌حیات‌خود‌را‌از‌دست‌می‌دهک یاخته‌هایی با مژه یا تاژک‌های درشت‌تر را انتخاب و با فوکوس روی اندامک‌های حرکتی
آن‌ها را بررسی کنید.به منظور مشاهده هسته و بررسی پدیده توانایی نفوذپذیری انتخابی غشاء در تک‌یاختگان بر روی دو گوشه یک الم هر طرف یک قطره محیط هی بگذارید، به هر کدام یک قطره رنگ آبی متیل افزوده یک طرف را المل گذاری کرده تا در نمونه‌های زنده هسته را مشاهده کنید. دقت کنید پس از چند دقیقه هسته متمایز می‌شود.
آزمایش دوم:
مشاهده و بررسی سلول های بافت عضلانی
عضله(Striated muscle)مخطط
اهداف آزمایش:
بررسی بافت عضلانی مخطط (Muscle tissue)
و بررسی کوچکترین واحد انقباضی
درون یاخته ای S
مقدمه:
پیکر مهره داران و برخی از بی مهرگان دارای دو نوع ماهیچه صاف و مخطط می باشد.در مهره داران ماهیچه قلبی نیز وجود دارد.
(Smooth Muscle)صاف ماهیچه 💛
(Cardiac Muscle) قلبی ماهیچه ❤
(Striated Muscle)مخطط ماهیچه 🧡
ماهیچه صاف تحت کنترل اعصاب مرکزی و عملکرد آن غیر ارادی می باشد و دراندام های داخلی مثل روده ها طحال و رگ های بزرگ قرار دارد.
از نظر سلول شناسی در مقایسه با عضله مخطط بدون اختصاصات ویژه می باشند.
ماهیچه مخطط از نظر عملکرد ارادی بوده و قابل کنترل می باشد و دارای اختصاصات سلول شناسی ویژه ای است.
ماهیچه قلبی از نظر سلول شناسی شبیه ماهیچه مخطط واز نظر عملکردی شبیه ماهیچه صاف می باشد و مسئول پمپاژ بی وقفه و غیر ارادی خون در قلب می باشد.
عضله مخطط:
ماهیچه‌های اسکلتی(به انگلیسی: Skeletal muscle یا muscle) یا مخطّط گروهی از عضلات بدن هستند که اصطلاحاً حرکات ارادی را انجام می‌دهند. (اما حرکت غیر ارادی هم دارند.مانند دیافراگم).ماهیچه‌های اسکلتی از هزاران تار ماهیچه‌ای انقباض‌پذیر تشکیل شده‌است که به صورت موازی در کنار یکدیگر قرار گرفته و توسط غلافی از بافت همبند احاطه شده‌است. این ماهیچه ها رنگی قرمز دارند و شکلی استوانه ای دارند و تماماً چند هسته ای هستند. این عضلات حدود دو سوم وزن بدن را تشکیل می دهند.
سلول های سازنده بافت عضلانی مخطط از سلول هایی به نام میو بلاست منشاء می گیرند.پس از شکل گیری سلول های عضلانی مخطط ،پر هسته ای بوده و هسته ها معمولا مسطح و به سطح زیرین غشاء محکم فشرده می شوند.این سلول ها بسیار طویل و به شکل استوانه می باشند طول آن ها در پیکر موجود زنده به چندسانتی متر می رسد.پهنای آن ها معمولا حدود 80-10میکرومتر می باشد و می توانند
حدود دو سوم وزن پیکر موجود زنده را به خود اختصاص دهند و از هزاران تار ماهیچه ای انقباض پذیر که در کنار هم به طور موازی قرار گرفته اند تشکیل شده و توسط غلافی
از بافت پیوندی احاطه می شوند.
بافت شناسی عضله مخطط:
این ماهیچه‌ها حاوی ۷۰٪ آب ،۲۰٪ پروتئین ۵٪ کربوهیدرات (به شکل گلیکوژن)، چربی‌ها و نمک‌ها هستند. بافت ماهیچه‌های اسکلتی از سلول‌های بزرگی (با طولی حدود ۱ الی 40 میلی‌متر و قطر ۱۰ الی ۸۰ میکرون) تشکیل شده‌است. سلول‌های ماهیچه‌های اسکلتی چند هسته یاخته‌ای هستند. غشا سلولی فیبر ماهیچه‌ای سارکولما نام دارد.
مواد و وسایل مورد نیاز:
. اسید استیک غلیظ .عضله مخطط قورباغه یا گوشت قرمز یا سفید(ران مرغ)
. لوگل . قیچی نوک تیز
. آبی متیل . پاستور پی پت
. سوزن تشریح . میکروسکوپ نوری
. لام و لامل
شرح آزمایش و روش کار:
جهت مشاهده سلول های عضلانی عضله مخطط و ساختار میوفیبریل هاابتدا تکه کوچکی از عضله ران قورباغه یا گوشت قرمز گوسفندي یاگوشت سفید را درون شیشه ساعت قرار داده و به مدت چند دقیقه جهت نرم شدن بافت عضله و از بین رفتن بافت پیوندی درون استیک اسیدغلیظ قرار دهید.سپس بافت را بر روی الم قرار داده و با سوزن تشریح به دقت ریش ریش کنید و پس از آن یک قطره رنگ لوگل اضافه کرده والمل گذاری نمایید.
بر روی لام دیگر بدون افزودن اسید استیک غلیظ توده عضلانی را ریش ریش کرده و یک قطره آبی متیل اضافه کنید سپس لامگذاری کرده و بر روی هر دو لام با انتهای خودکار چند ضربه بزنید تا سلول های بافت بین لام و لامل پخش شوند با کاغذ خشک کن پرس نمایید و با انگشت شصت فشار دهید تا فیکس شود به این روش تهیه لام اسکواش کردن مي گویند..سپس با عدسی x 4 و x 10 در زیر میکروسکوپ مشاهده کنید.
مشاهدات:
در سلول های استوانه ای عضله مخطط هسته ها توسط آبی
متیل به رنگ آبی متیل مشاهده می شوند در اینحالت پر هسته ای بودن آن ها را بررسی می‌شود.همچنین در میوفیبریل ها که توسط لوگل متمایز شده اند ساختار خط خطی بودن و چیدمان سارکومررا در طول میوفیبریل مشاهده می‌شود.دربین قسمت های مختلف لام های تهیه شده به مویرگ های خونی و سلول های خونی عضله گوشت نیز دقت شود.
ماهیچه مخطط استخوان متراکم ماهیچه صاف بافت سنگفرشی پوششي مطبق(پوست)
منابع:
پاور آزمایشگاه زیست سلولی و مولکولی، فرزانه فروهرفر
.
صفحه ویکی پدیا به آدرس:
https://fa.m.wikipedia.org/wiki/%D9%...
.
